...probes)已被成功的用于原位杂交实验。图20-2 示cDNA转录为cRNA,可标记以不同的标记物,然后与细胞中的mRNA相结合。Biotin(生物素),Au(金),digo-(地高辛)一、同位素标记cRNA探针在ISHH中的应用(一)组织...
...Angerer及其同事们首先应用RNA探针于原位杂交(见Cox et al 1984),核酸探针为单链的RNA分子,产生自具有质粒逆转录系统的cDNA克隆(图20-2)。由于它是单链的,不像双链的DNA探针,在溶液中不会再退火(...
...核仁中。与此同时,Buongiorno – Nardelli和Amaldi,John及其同事等相继利用同位素标记核酸探针进行了细胞或组织的基因定位,从而创造了原位杂交细胞或组织化学技术。Orth(1970)应用3H标记的兔乳头状瘤病毒cRNA...
...(一)光敏生物素标记cRNA探针的应用以线性质粒DNA为模板合成未加标记物的cRNA探针,使其最终浓度为0.5~1.0μg/μl(500~1000ng/μl),再与等体积的光敏生物素(1μg/μl)混合。在150瓦卤素灯下,距离光源20...
...寡核苷酸探针在原位杂交组织化学技术中的成功与否主要决定于探针的设计,使有效配对率增加而错配(mismatch)减少。(一)地高辛标记寡核苷酸探针的应用1.组织处理(1)冷冻切片:厚10~20μm,贴于事先经清洁处理及涂有粘附剂的切片上。切片保存...
...显示(visual-ization):包括放射性自显影和非放射性标记的显色。(一)固定原位杂交组织化学技术(In Situ HybridizationHistochemistry, ISHH)在固定剂的应用和选择上应兼顾到三个方面:保持细胞...
...创造了原位杂交细胞或组织化学技术。Orth(1970)应用3H标记的兔乳头状瘤病毒cRNA探针与兔乳头状瘤组织的冰冻切片进行杂交,首次用原位杂交检测了病毒DNA在细胞中的定位,但当时的工作多采用冰冻组织切片或培养细胞,探针均采用同位素标记。...
...原位杂交组织化学(In situ hybridization histochemistry, ISHH)是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与组织、细胞中待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合,形成杂交体,然后再应用与标记物相应的...
...原位杂交组织化学(In situ hybridization histochemistry, ISHH)是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与组织、细胞中待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合,形成杂交体,然后再应用与标记物相应的...
...近年,不少科技工作者将原位杂交组织细胞化学技术(ISHH)应用于细胞分裂中期(Metaphase)和分裂间期(Interphase)的染色体铺片上,利用标记的核苷酸探针与之进行杂交,可在光镜或电镜水平检测到不同的特异性的标记物。目前,...
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