...所有实验结果都有成功或失败，实验的失败可能是应该出结果而没有出，我们把它称作假阴性，不该出结果而出了结果我们把它称为假阳性。PCR实验中最常见的问题就是假阴性和假阳性问题。（一）假阴性：出现假阴性结果最常见的原因是：Taq DNA聚合酶...
...减少了与错配引物的延伸。在PCR反应中，每100μl反应液中含1-2.5u Taq DNA聚合酶为佳，酶的浓度太低会使扩增产物产量降低，如果酶的浓度太高则会出现非特异性扩增。Taq DNA聚合酶保存不当而失活是PCR实验失败的常见原因。（七）...
...杂质能抑制Taq DNA聚合酶的活性。另外，处理标本可使待扩增DNA暴露，能与引物复性。关于PCR标本制备各种专业书中介绍了许多，我们实验发现操作复杂、不慎便容易造成污染，且不实用。现介绍一种简单快速的处理方法即3%异硫氰酸胍和待检标本混合...
...（一）试剂（1）引物：决定扩增的特异性。根据检测的DNA不同，选用不同引物，每种病原微生物都有自己特异的引物。（2）耐热的DNA聚合酶：此酶是从耐热细菌中分离出来的，能耐受高温90℃-100℃。（3）10×PCR缓冲液：500mmol/l...
...用于PCR的标准缓冲液见PCR操作范例。于72℃时，反应体系的pH值将下降1个单位，接近于7.2。二价阳离子的存在至关重要，影响PCR的特异性和产量。实验表明，Mg2+优于Mn2+，而Ca2+无任何作用。1．Mg2+浓度Mg2+的最佳浓度...
...有核基因组含有大量中度和高度重复序列，而在YAC或Cosmid中的未知功能序列中有时也会有这些序列，这样，通过反向PCR得到的探针就有可能与多个基因序列杂交。利用反向PCR可对未知序列扩增后进行分析，探索邻接已知DNA片段的序列，并可将仅知...
...标记和检测 三、核酸分子杂交方法 第三节 基因扩增技术（PCR） 一、PCR的基本原理和基本程序 二、PCR的特点 三、PCR方法 四、PCR反应的基本条件及其对PCR的影响 五、PCR标本的制备 六、PCR实验中常见问题对策 七、PCR扩增...
...的制备 ◦ 六、PCR实验中常见问题对策 ◦ 七、PCR扩增产物的分析法 第二章 性传播疾病概论 第一节 性病的传播方式 第二节 性病的流行及现状 第三节 综合治理防治性病 各论 第三章 淋病 第一节 病原学 第二节 淋球菌的遗传学 第三节...
...人疱疹病毒——一种可在接受器官移植的儿科患者中引起严重后果的病毒——可通过聚合酶链反应（PCR）进行监测。 接受器官移植的儿童往往会由于疱疹病毒的存在而预后极差甚至死亡。德克萨斯大学的R. H. Scheuermann及其同事研究了PCR...
...10μl Taq多聚酶（lu/μl,Gene Amp Cetuo）。把上述溶液加入左侧二孔中，留一孔加入无引物的PCR混合液作为对照。将载片以22×66mm盖片覆盖，片周以无色指甲油封闭，放入自动的热循环仪（M.J.Re－seasCH,...
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