...标记物。这些都是放射免疫分析能取得高特异性和高灵敏度的关键问题。多肽激素与蛋白质多用碘标记,最常用的是125I。碘化反应的基本过程如下:通过氧化剂的作用,使碘化物(125I-)氧化成的碘分子(125I2),再与多肽激素、蛋白质分子中的酪氨酸...
...简单,一般实验室都不难做到。二、蛋白质与多肽激素的放射性碘标记要制备高比度、高纯度与免疫化学活性好的标记物,首先要有高纯度、良好免疫活性的抗原。用作放射标记加网免疫分析的特异性,所以若用纯度不高的抗原作标记,则标记后必须采取适当的步骤除去...
...防护和除污染,以及减少射线对蛋白质分子的损伤,标记投入的放射碘量不宜过大,一般以<5mCi为宜。(2)放射性碘与多肽、蛋白质用量的比例:这比例对标记结果的影响很大。如上述原因,一般标记时放射性投入量不宜过多,示踪实验室中常规每次只用1~2...
...根据使用要求而定,因为同一标记物其生物活性的变化与免疫活性的变化不一定相关;同一标记激素,其与受体结合能力的改变与抗体结合能力的改变也不一定平行。(3)测定方法:测定标记蛋白质或多肽的生物活性和免疫活性常用的方法有下述几种:①物理化学方法:...
...,pH8.0~8.5为宜,在冰浴中反应15~30min后,加入多量氨基酸(如甘氨酸),使过量标记酯消耗掉以终止反应。此法避免了蛋白质与氧化剂的接触,又避免了与放射性碘原子的直接接触,可防止碘源中有害物质对蛋白质的损伤,适用于标记缺乏酪氨酸的...
...此法具有标记率高、反应体积小(3ml水平)、可用低浓度的125I原料、对多肽激素和蛋白质的免疫活性损失小、稳定等优点,系常规的碘化方法之一。1.原理 用Iodogen为氧化剂,对蛋白质和多肽抗原进行碘化标记,把125I直接引进分子中的...
...高效液相层析法等。现以碘标记蛋白为例,说明以上各种方法的适用情况。1.凝胶过滤法常用的是SephadexG系列,也有Biogel—P系列。分离标记蛋白与无机碘时,通常用Sephadex G—25或G—50,然后用G—100进一步纯化。2....
...在RIA中,标记抗原质量的优劣,直接影响测定结果,必须制备比放射性强、纯度高的标记抗原,并保持免疫活性不受丧失。...
...T是对甲苯磺基酰胺的N-氯衍生物的钠盐,在水溶液中逐渐分解形成次氯酸,是一种氧化剂。在偏碱溶液中(pH7.5),氯胺T将125I的I-氧化为I+,I+取代蛋白质酪氨酸苯环的氢,形成二碘酪氨酸。反应式如下:放射性碘标记率的高低与抗原(蛋白质或...
...磺基酰胺的N-氯衍生物的钠盐,在水溶液中逐渐分解形成次氯酸,是一种氧化剂。在偏碱溶液中(pH7.5),氯胺T将125I的I-氧化为I+,I+取代蛋白质酪氨酸苯环的氢,形成二碘酪氨酸。反应式如下:放射性碘标记率的高低与抗原(蛋白质或多肽)分子...
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