...球蛋白的溶液离心（2500r/min）20min，除去其中少量之沉淀物，装入透析袋中后再置于烧杯中，用pH8.0缓冲盐水透析（0～4℃）过夜。⑤过柱：取透析过夜的标记物，过葡聚糖凝胶G-25或G-50柱，分离游离荧光素，收集标记的荧光抗体进行...
...Kbaffan等（1986）首先创立了蓝色荧光素标记和染色技术，可进行双标记或多标记。（1）取7-氨基-4-甲基香豆素（7-amino-4-methyl coumarin, AMC）260μg溶于二甲亚砜25μl中。（2）将上液加入10...
...用荧光素、同位素或酶标记抗体或抗原，用于抗原或抗体检测是目前广泛应用的敏感、可靠的方法。上述三种常用的标记物与抗原或抗体化学连接之后不改变后者的免疫特性。本方法可用于定性、定量或定位检测。1．免疫荧光技术 免疫荧光技术（...
...适用于标记体积较大，蛋白含量较高的抗体溶液。优点是标记时间短，荧光素用量少。但本法的影响因素多，若操作不当会引起较台强的非特异性荧光染色。透析法适用于标记样品量少，蛋白含量低的抗体溶液。此法标记比较均匀，非特异染色也较低。方法为：先将待标记...
...可用于双标记示踪研究。化学结构式如下（图3-10）。图3-9 TMRITC在可见光区的吸收光谱和发射光谱图3-10 TMRITC结构式二、荧光素标记抗体的方法（一）FITC标记抗体的方法1．Marsshall 氏法（1）材料：抗体球蛋白溶液...
...取1g RB200及PCL52g放在乳钵中研磨5min（在通风橱中）。然后加入10ml无水丙酮，放置5min，不断搅拌。过滤，用滤液进行标记抗体。剩余部分吸附在滤纸上，4℃干燥保存。取抗体（20mg/ml）每毫升加入生理盐水和0.5mol...
...方法为：先将待标记的蛋白质溶液装入透析袋中，置于含FITC的0.01mol/LpH9.4碳酸盐缓冲液中反应过夜，以后再对PBS透析法去除游离色素。低速离心，取上清。标记完成后，还应对标记抗体进一步纯化以去除未结合的游离荧光素和过多结合荧光素...
...免疫技术是利用抗原抗体反应进行的检测方法，即应用制备好的特异性抗原或抗体作为试剂，以检测标本中的相应抗体或抗原。它的特点是具有高度的特异性和敏感性。如将试剂抗原或试剂抗体用可以微量检测的标记物（例如放射性核素、荧光素、酶等）进行标记，则在...
...免疫化学方法是利用抗原与其相应抗体具有特异结合的特性，用荧光素、酶、发光素、同位素、胶体金标记某种抗原的抗体，借助荧光显微镜、电镜、图像分析仪、同位素监测仪、分光亮度仪便可对组织中的抗原进行定性或定量，可用于胶原、蛋白多糖、弹性蛋白、粘连...
...标记的荧光素分子太多，这种过量标记的抗体分子带过多的阴离子，可吸附于正常组织上而呈现非特异性染色。（6）荧光素不纯，标本固定不当等。二、消除非特异性染色的方法消除荧光抗体非特异性染色的方法应根据产生的原因采取适当的方法，常用的方法有以下几种：...
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