...0.2~0.45μm,所有器皿应清洁和专用。整个操作过程应在湿盒内进行,以使载网保持湿润。二、胶体金标记蛋白A技术(Protein A-goldtechnique, PAg法)在电镜水平应用较为广泛,因该法具有特异性中、灵敏度高、方法简便和...
...SPA致敏绵羊红血球,与经IgG处理的细胞形成玫瑰花环,来鉴定带Fc受体的细胞,反之,如用SPA抑制玫瑰花环形成,则可定量测定细胞表面的IgG。应用SPA与胶体金或铁蛋白相结合,可在电镜水平检查抗原抗体反应的定位。特别是蛋白A—胶体金技术(...
...水平,金颗粒具有很高的电子密度,清晰可辨。因此,免疫电镜胶体金标记法近年来被成功地应用于生物学的各个方面,并取得了要喜的进展,解决了一些过去未能解决的问题,80年代以来似有取代免疫电镜PAP技术的趋势。胶体金标记抗体技术在电镜水平应用有许多...
...(1)胶体金液的制备,应用枸椽酸三钠还原法(见第五章 )。(2)待标记蛋白质和金溶液的准备,同前。注意点是用0.2mol/l K2CO3将金溶液pH调至5.9~6.2之间。(3)确定胶体金与蛋白A的结合用量比例。取一系列盛有0.1ml...
...1971年,Faulk 和Taylor首先将兔抗沙门氏菌抗血清与胶体金颗粒结合,用直接免疫细胞化学技术检测沙门氏菌的表面抗原。此后,他们还把胶体金与抗胶原血清,植物血凝素,卵白蛋白,人免疫球蛋白轻链、牛血清白蛋白结合应用。1974年Romano...
...相互排斥而不能互相结合。为防止蛋白质与胶体金的聚合与沉淀,常用牛血清白蛋白,卵白蛋白,聚乙二醇或明胶作稳定剂。用Sephacryb S—400 (丙烯葡聚糖S—400)层析分离纯化胶体金蛋白标记物只适用于以BSA作稳定剂者。一、待标记蛋白质的...
...rDNA及UI探针,在蜂蝇(Drosophila)卵巢,应用Lowicryl-K4M低温包埋的切片上进行原位分子杂交,以蛋白A和胶体金复合物作为显示系统,较好的保存了组织的形态学结构和较高的信噪比例。Webster等人(1986)应用生物素...
...1971年,Faulk 和Taylor首先将兔抗沙门氏菌抗血清与胶体金颗粒结合,用直接免疫细胞化学技术检测沙门氏菌的表面抗原。此后,他们还把胶体金与抗胶原血清,植物血凝素,卵白蛋白,人免疫球蛋白轻链、牛血清白蛋白结合应用。1974年Romano...
...的抗原相结合,占据了空间,第二次应用的抗体没有适合的空间使之与相应的抗原相结合。3.异种动物抗原—抗体染色法如一抗分别用人与兔抗血清,人抗组织抗原A,兔抗组织抗原B。第二抗体分别以不同直径金粒标记的抗人和兔免疫球蛋白。由于种属不同,两种...
...大小不一,加之非特异性反应产物常掩盖微细结构的背景,不易达到准确的定位。现在比较广泛应用的是生物素-蛋白A(PA)胶体金(gold)标记技术。用于原位杂交的电镜定位,取得较为满意的效果。其基本原理是利用生物素标记探针与细胞或组织进行原位杂交...
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