...一、特异性目的核酸(或基因)的制备核酸分子探针的制备首先需要获得所要的特异性核酸或其片段。可用以下方法制备:(1)直接分离基因核酸:即从基因组上直接用内切酶切下所需基因。(2)化学合成基因核酸:即以单核苷酸为原料,以固相磷酸三酯法合成某一...
...核酸分子探针的制备首先需要获得所要的特异性核酸或其片段。可用以下方法制备:(1)直接分离基因核酸:即从基因组上直接用内切酶切下所需基因。(2)化学合成基因核酸:即以单核苷酸为原料,以固相磷酸三酯法合成某一结构完全清楚,分子量较小的寡核苷核...
...在获得特异的目的基因后,可用以下方法大量扩增制备:①用体外DNA重组技术与载体DNA相连,转化至大肠杆菌中进行无性繁殖。以氯化铯超速离心纯化重组质粒DNA,并以合适限制性内切酶消化,经凝胶电泳制备回收特异的目的核酸片段。②聚合酶链式反应(...
...基因诊断的被检测基因或目的基因存在于样品中,先将样品中核酸提取出来,或在原位,或将样品点在硝酸纤维素滤膜上,再经蛋白酶处理,或酶切成较小的片段,经变性处理(热或碱变性)成单链。另一方面制备已知核酸序列标记的核酸分子探针,也经变性成单链。根据...
...基因诊断的被检测基因或目的基因存在于样品中,先将样品中核酸提取出来,或在原位,或将样品点在硝酸纤维素滤膜上,再经蛋白酶处理,或酶切成较小的片段,经变性处理(热或碱变性)成单链。另一方面制备已知核酸序列标记的核酸分子探针,也经变性成单链。根据...
...利用寡核苷酸自动合成仪,可很简单地合成制备寡核苷酸探针(如15~50bp),这类探针具有以下优点:①短的探针比长探针杂交速度快,特异性强。②可以在短时间内大量制备。③在合成中进行标记制成探针。④可合成单链探针,避免了用双链DNA探针在杂交...
...利用寡核苷酸自动合成仪,可很简单地合成制备寡核苷酸探针(如15~50bp),这类探针具有以下优点:①短的探针比长探针杂交速度快,特异性强。②可以在短时间内大量制备。③在合成中进行标记制成探针。④可合成单链探针,避免了用双链DNA探针在杂交...
...肽疫苗是仿特异性抗原的某些肽链或蛋白人工合成的抗原形成的疫苗,现今还没有被用于人群。 基因(核酸)疫苗是相对于基因(核酸)免疫来说的。它是将含有编码特定抗原蛋白质的基因序列克隆到合适的质粒载体上,制备成核酸表达载体,通过肌肉注射等方法将其...
...免疫细胞化学又称免疫组织化学、其主要原理是用标记的抗体(或抗原)对细胞或组织内的相应抗原(或抗体)进行定性、定位或定量检测,经过组织化学的呈色反应之后,用显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察。凡是能作抗原、半抗原的物质,如蛋白质、多肽、核酸...
...一、基因组DNA文库从生物组织细胞提取出全部DNA,用物理方法(超声波、搅拌剪力等)或酶法(限制性核酸内切酶的不完全酶解)将DNA降解成预期大小的片段,然后将这些片段与适当的载体(常用噬菌体、粘粒或YAC载体)连接,转入受体细菌或细胞,...
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