...一、特异性目的核酸（或基因）的制备核酸分子探针的制备首先需要获得所要的特异性核酸或其片段。可用以下方法制备：（1）直接分离基因核酸：即从基因组上直接用内切酶切下所需基因。（2）化学合成基因核酸：即以单核苷酸为原料，以固相磷酸三酯法合成某一...
...核酸分子探针的制备首先需要获得所要的特异性核酸或其片段。可用以下方法制备：（1）直接分离基因核酸：即从基因组上直接用内切酶切下所需基因。（2）化学合成基因核酸：即以单核苷酸为原料，以固相磷酸三酯法合成某一结构完全清楚，分子量较小的寡核苷核...
...基因诊断的被检测基因或目的基因存在于样品中，先将样品中核酸提取出来，或在原位，或将样品点在硝酸纤维素滤膜上，再经蛋白酶处理，或酶切成较小的片段，经变性处理（热或碱变性）成单链。另一方面制备已知核酸序列标记的核酸分子探针，也经变性成单链。根据...
...基因诊断的被检测基因或目的基因存在于样品中，先将样品中核酸提取出来，或在原位，或将样品点在硝酸纤维素滤膜上，再经蛋白酶处理，或酶切成较小的片段，经变性处理（热或碱变性）成单链。另一方面制备已知核酸序列标记的核酸分子探针，也经变性成单链。根据...
...每一寡核苷酸分子可带有若干个放射性原子，放射性比活度可高达2×1010计数/（min·mg）。附图 DNA聚合酶i Klenow片段标记合成寡核苷酸探针寡核苷酸探针的非放射性标记时，可用以下几种方法：1．酶延伸法合成与探针目的基因的3’-端...
...分子杂交是核酸链间碱基配对规则的一种结合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测，必须将杂交链中的一条用某种可以检测的分子进行标记，这条链就称为核酸探针。因此，核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。最早采用的...
...在获得特异的目的基因后，可用以下方法大量扩增制备：①用体外DNA重组技术与载体DNA相连，转化至大肠杆菌中进行无性繁殖。以氯化铯超速离心纯化重组质粒DNA，并以合适限制性内切酶消化，经凝胶电泳制备回收特异的目的核酸片段。②聚合酶链式反应（...
...放射性标记核酸探针在使用中的限制，促使非放射性标记核酸探针的研制迅速发展，在许多方面已代替放射性标记，推动分子杂交技术的广泛应用。目前已形成两大类非放射标记核酸技术，即酶促反应标记法和化学修饰标记法。酶促反应标记探针是用缺口平移法，随机...
...每一寡核苷酸分子可带有若干个放射性原子，放射性比活度可高达2×1010计数/（min·mg）。附图 DNA聚合酶i Klenow片段标记合成寡核苷酸探针寡核苷酸探针的非放射性标记时，可用以下几种方法：1．酶延伸法合成与探针目的基因的3’-端...
...和Charon 系列等。用这类载体可以得到包含105以上转化子文库，再经前面介绍的筛选方法筛选特定基因克隆。用这种技术获得的DNA探针不含有内含子序列。因此尤其适用于基因表达的检测。（三）RNA探针RNA探针是一类很有前途的核酸探针，由于...
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