...所得到的目的序列或基因的克隆,都要用其核酸序列测定来最后鉴定。已知序列的核酸克隆要经序列测定确证所获得的克隆准确无误;未知序列的核酸克隆要测定序列才能确知其结构、推测其功能,用进一步的研究。因此核酸序列测定是分子克隆中必不可少的鉴定步骤。...
...示意图二、双脱氧链止终法测定战略由于DNA一般都由几千个单核苷组成。而目前测定DNA序列的最好方法,一次也只能测约600个核苷酸,因此进行DNA顺序测定前,需要用不同限制酶消化等测DNA,使其降成小片段,分别克隆到pUC1,18pUCl18,...
...示意图二、双脱氧链止终法测定战略由于DNA一般都由几千个单核苷组成。而目前测定DNA序列的最好方法,一次也只能测约600个核苷酸,因此进行DNA顺序测定前,需要用不同限制酶消化等测DNA,使其降成小片段,分别克隆到pUC1,18pUCl18,...
...核酸一级结构分析是基因分析最直接的第一手资料。目前DNA、RNA以及蛋白质的一级结构分析中,DNA的碱基序列分析方法多样、简单、快速。下面就M13噬菌体-双脱氧核苷酸(ddNTP)的DNA测序法介绍如下。M13是单链DNA噬菌体,转染宿主...
...将目的基因或序列插入载体,主要靠DNA连接酶和双链DNA粘末端单链序列互补结合的配合使用。有以下主要的方式。一、粘性末端连接如果目的序列两端有与载体上相同的限制性核酸内切酶位点,则同一限制酶切开产生的粘末端,在降低温度退火时,能重新互补...
...在PCR反体系中dNTP终浓度高于50mmol/L会抑制Taq酶的活性,使用低浓度dNTP可以减少在非靶位置启动和延伸时核苷酸错误掺入,高浓度dNTPs易产生错误掺入,而浓度太低,势必降低反应物的产量。PCR常用的浓度为50~200μ...
...及诊疗研究中也有重要的作用。例如在研究脂蛋白酯酶基因发生的特异突变时,可以设计合成扩增引物,进行模板DNA的PCR扩增,所得的PCR产物较小,仅有300多bp,且纯度不足以进测序。为了对此突变序列进行测序分析,就可以采用DNA克隆的方法,将...
...种进化较一致,因此被广泛用于高等植物近缘种的鉴别。 北京军区总医院药理科通过对rDNA-ITS序列差异分析,探讨中药葛根及其近缘种的分类地位及系统发育关系,为葛根的指纹图谱鉴别提供分子标记。 方法:测定并分析葛属3种植物的内转录间隔区(...
...及诊疗研究中也有重要的作用。例如在研究脂蛋白酯酶基因发生的特异突变时,可以设计合成扩增引物,进行模板DNA的PCR扩增,所得的PCR产物较小,仅有300多bp,且纯度不足以进测序。为了对此突变序列进行测序分析,就可以采用DNA克隆的方法,将...
...依次论述 expound in sequence 按某种档次排列 put in order 档次 array;alignment 同一序列 国语辞典 按次序排好的行列。 依次論述。 史記.卷六十一.伯夷傳:「孔子序列古之仁聖賢人,如吳太伯...
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