...扩增反应并不是可以无穷地进行下去的,经过一定的循环周期后需扩增的片段不再按指数增多而逐渐进入平坡;进入平坡的循环次数,取决于起始时存在的模板拷贝数以及合成的DNA总量。所谓平坡就是批PCR循环的后期,合成产物达0.3~1pmol时,由于...
...美国Scripps研究所日前进行的一项新研究,揭示了胰腺干细胞扩增所需的重要信号途径。这项研究将有助于研发出能预防或逆转胰岛素依赖型糖尿病(IDDM,1型糖尿病)。该研究由美国健康研究院资助、为期5年,其研究结果公布在日前出版的《生物化学...
...PCR扩增DNA片段只是一个重要手段。扩增片段的检测和分析才是目的,根据研究对象和目的的不同而采用不同的分析法。琼脂糖凝胶电泳可帮助判断扩增产物的大小,有助于扩增产物的鉴定,点杂交除可鉴定扩增产物外,还有助于产物的分型;Southern...
...小卫星DNA和微卫星DNA的长度多态性可以通过PCR扩增后电泳来检出,并用于致病基因的连锁分析,这种诊断方法称为扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism,Amp-FLP)连锁分析法。...
...通过大肠埃希菌繁殖而增殖重组质粒,也是扩增核酸的手段。但在试管中有效扩增DNA的方法,是在90年代才开展起来的多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)新技术。由于PCR灵敏度高、特异性好、操作方便,在我国...
...扩增样本中的RNA,一般要先将其逆转录成cDNA,再以cDNA为模板进行PCR扩增,能否将RNA靶序列直接扩增出来呢?Kwok等人发明了TAS来解决这一问题。结合应用葡聚糖珠寡核苷酸杂交技术可进一步提高方法的特异性和效率。其原理是:制备...
...聚合酶链反应(polymerasechain reaction简称PCR)又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法,是基因扩增技术的一次重大革新。可将极微量的靶DNA特异地扩增上百万倍,从而大大提高对DNA分子的分析...
...在获得特异的目的基因后,可用以下方法大量扩增制备:①用体外DNA重组技术与载体DNA相连,转化至大肠杆菌中进行无性繁殖。以氯化铯超速离心纯化重组质粒DNA,并以合适限制性内切酶消化,经凝胶电泳制备回收特异的目的核酸片段。②聚合酶链式反应(...
...,另一端连接抗原-抗体复合物,形成一个特殊的抗原-抗体-DNA连接物。作为标记物的DNA分子可用PCR的扩增,存在特异的PCR产物应证明作为标记物的DNA分子已特异地与抗原-抗体复合物结合,而且表明了抗原的存在。有人采用SAP(...
...也有利于口蹄疫的监测。 近年来,依赖核酸序列的扩增技术(nasba)经常被用来检测如禽流感病毒、新城疫病毒、病毒和口蹄疫病毒等引起的病毒性疾病。最近有学者通过检测从世界各地收集的200份疑似口蹄疫病毒感染样品,对nasba-电化学发光法(...
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