...纵坐标，蛋白质用量为横坐标作一曲线，取曲线最先与横轴相接近的那一点处的蛋白质用量为最适稳定量。图5.2中10nm的胶体金溶液中蛋白质的最适稳定量为45μg/ml。图5-2 蛋白最适稳定量示意图（2）目测法：以目测法确定胶体金与待标记蛋白质用量...
...当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH值被确定以后便可进行标记。具体步骤如下：（1）根据用以标记的胶体金的总量计算出所需要的待标记蛋白质的总量。（2）在电磁搅拌下，将蛋白质溶液加入胶体金溶液中（pH已调至PI超过0.5pH），加入蛋白质时...
...6.9DNAase6.0RNAase9.0低密度脂蛋白5.5α2-巨球蛋白6.0抗生物素蛋白（亲合素）10.0链霉抗生物素蛋白6.6麦胚凝集素9.9三、待标记蛋白质最适稳定量的测定（1）光电比色法：制备一系列不同浓度的等体积蛋白质溶液（1ml...
...有极少量的碘的污染，非放射性碘就会稀释放射性碘，使放射性碘利用率显著降低。为了便于放射性防护和除污染，以及减少射线对蛋白质分子的损伤，标记投入的放射碘量不宜过大，一般以<5mCi为宜。（2）放射性碘与多肽、蛋白质用量的比例：这比例对标记结果...
...（1）透析除盐：蛋白质溶液内应除去多余的电解质，不然过高的盐类物质会降低胶体金颗粒的Zeta电位，影响蛋白质的吸附，因此，标记之前必须彻底除盐。一般将蛋白质置入透析袋中然后直接放入双蒸水或极低浓度的盐水（0.005mol/l NaCl ,...
...蛋白质溶液浓度测定方法有多种，下述几种方法可供选用。蛋白质浓度的测定，往往用于计算纯化方法的回收率的重要方法。一、双缩脲法双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法，至令仍广泛采用。在需要快速，但不很准确的测定中，常用此法。硫铵不干扰...
...混合室，用另一个泵混入闪烁液，测定软β射线。可以与紫外控测器的扫描图，同步描绘出放射性的分布图。③放射性核素反稀释法：取一定量（W1）已测定比活度（SO）的标记化合物（约0.1～10mg），用>1000倍化学量（W2）的纯载体稀释，充分混匀...
...生化学家将酶活性最高处的pH称为最适pH。一般来说，血清中大多数酶最适pH接近中性（pH6.5-7.5）。有些酶在最适pH处活性变化尖锐明显，也有些平坦宽广。测定酶活性浓度时一定要选择在最适pH处，不仅因为此处酶反应速度最大，测定灵敏度最高，...
...蛋白质溶液浓度测定方法有多种，下述几种方法可供选用。蛋白质浓度的测定，往往用于计算纯化方法的回收率的重要方法。一、双缩脲法双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法，至令仍广泛采用。在需要快速，但不很准确的测定中，常用此法。硫铵不干扰...
...原因分清。此时先将酶与不同pH底物缓冲液温育一段时间，此时间一般与测定时间相当，然后再将pH调回最适pH处测其活性。从曲线B可以说在pH5-6.8以及pH6.8-8.0之间酶活性的下降与酶灭活关系不大，酶在最适pH处储存常数稳定。但有些酶贮存...
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