(1)光电比色法:制备一系列不同浓度的等体积蛋白质溶液(1ml),分别加入5ml胶体金中,迅速混匀,然后,各加入1ml 10% NaCl溶液,摇匀,静置5min后测各管。根据胶体金颗粒的大小,OD在520~580nm之间测定,以OD值为纵坐标,蛋白质用量为横坐标作一曲线,取曲线最先与横轴相接近的那一点处的蛋白质用量为最适稳定量。图5.2中10nm的胶体金溶液...
(1)透析除盐:蛋白质溶液内应除去多余的电解质,不然过高的盐类物质会降低胶体金颗粒的Zeta电位,影响蛋白质的吸附,因此,标记之前必须彻底除盐。一般将蛋白质置入透析袋中然后直接放入双蒸水或极低浓度的盐水(0.005mol/l NaCl , pH7.0)透析。 (2)去除蛋白质中的沉淀:长期低温保存的蛋白质或4 ℃ 较长时间保存的抗体,特别是在浓度高于2mg/...
蛋白质溶液浓度测定方法有多种,下述几种方法可供选用。蛋白质浓度的测定,往往用于计算纯化方法的回收率的重要方法。 一、双缩脲法 双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法,至令仍广泛采用。在需要快速,但不很准确的测定中,常用此法。硫铵不干扰显色,这对蛋白质提纯的早期价段是非常有利的。双缩脲法的原理是Cu2+与蛋白质的肽键,以及酪氨酸残基络合,形成 紫蓝 色络...
当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH值被确定以后便可进行标记。具体步骤如下: (1)根据用以标记的胶体金的总量计算出所需要的待标记蛋白质的总量。 (2)在电磁搅拌下,将蛋白质溶液加入胶体金溶液中(pH已调至PI超过0.5pH),加入蛋白质时应逐滴加入,1mg的蛋白质大约5min加完。 (3)在磁性搅拌下加入5%的 牛血 清白蛋白(BSA)使其终浓度为1%,或...
蛋白质溶液浓度测定方法有多种,下述几种方法可供选用。蛋白质浓度的测定,往往用于计算纯化方法的回收率的重要方法。 一、双缩脲法 双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法,至令仍广泛采用。在需要快速,但不很准确的测定中,常用此法。硫铵不干扰显色,这对蛋白质提纯的早期价段是非常有利的。双缩脲法的原理是Cu 2+ 与蛋白质的肽键,以及酪氨酸残基络合,形成 紫蓝 ...
蛋白质溶液浓度测定方法有多种,下述几种方法可供选用。蛋白质浓度的测定,往往用于计算纯化方法的回收率的重要方法。 一、双缩脲法 双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法,至令仍广泛采用。在需要快速,但不很准确的测定中,常用此法。硫铵不干扰显色,这对蛋白质提纯的早期价段是非常有利的。双缩脲法的原理是Cu 2+ 与蛋白质的肽键,以及酪氨酸残基络合,形成 紫蓝 ...
蛋白质溶液浓度测定方法有多种,下述几种方法可供选用。蛋白质浓度的测定,往往用于计算纯化方法的回收率的重要方法。 一、双缩脲法 双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法,至令仍广泛采用。在需要快速,但不很准确的测定中,常用此法。硫铵不干扰显色,这对蛋白质提纯的早期价段是非常有利的。双缩脲法的原理是Cu 2+ 与蛋白质的肽键,以及酪氨酸残基络合,形成 紫蓝 ...
标记好的免疫金探针必须经过纯化处理以后才能用于免疫细胞化学染色。纯化的目的是除去其中未标记的蛋白质,未充分标记的胶体金以及在标记过程中可能形成的各种聚合物。
蛋白质(protein)是一种复杂的 有机化合物 ,是人体的必须营养素。蛋白质是细胞组分中含量最为丰富、功能最多的高分子物质,在生命活动过程中起着各种生命功能执行者的作用,几乎没有一种生命活动能离开蛋白质,多以没有蛋白质就没有生命。 蛋白质占人体重量的16.3%, 人体干重 的54%。人体中估计有10万种以上的蛋白质。蛋白质主要由 氨基酸 组成,因氨基酸的组...
蛋白质(protein)是一种复杂的 有机化合物 ,是人体的必须营养素。蛋白质是细胞组分中含量最为丰富、功能最多的高分子物质,在生命活动过程中起着各种生命功能执行者的作用,几乎没有一种生命活动能离开蛋白质,多以没有蛋白质就没有生命。 蛋白质占人体重量的16.3%, 人体干重 的54%。人体中估计有10万种以上的蛋白质。蛋白质主要由 氨基酸 组成,因氨基酸的组...
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