...)0.05mol/l TBS pH8.2洗3min。(11)0.05mol/l TBS pH7.4洗3min×3(12)1%锇酸(0.1mol/l PBS溶液)1h。(13)双蒸水洗15min。(14)系列酒精或丙酮脱水,包埋、超薄切片。(...
...(1)超薄切片厚50~70nm左右,载于200~300网孔的镍网上。(2)置1%H2O2内10min至1h(视树脂的硬度和切片的厚度而定),以去锇酸和增进树脂穿透性,有利抗体进入。如切片很薄或于低温包埋时,此步可省略。操作时,滴入1%H2...
...电子束的轰击不变形,而且影像反差好,分辨率高,但其半薄切片染色不够满意始终是个有待解决的问题。而GMA包埋切片的染色效果明显优于环氧树脂。于是电镜工作者如Leduc和Bernhard(1986)尝试以增加一定比例的增塑剂如甲基丙烯酸酯和少量水外...
...关于免疫金银细胞化学的原理、试剂配制和光镜显示技术在本书第五章 已作了较详尽的叙述。免疫金银细胞化学技术说可应用于电镜水平。一般用于包埋前染色。其主要操作步骤如下:(1)组织固定振动切片机切片10~30μm。(2)人3%正常羊血清,含...
...片时用OCT包埋,以减少冰冻切片过程中冰晶的形成。如果切片还准备用于电镜包埋,则可经过5%,10%,20%浓度逐级递增的蔗糖溶液。在冰冻切片前,可先入氟里昂–22 (Freon--22)骤冷,这样可使组织的结构保存更好,适用于电镜观察。(1)...
...在解剖显微镜下检出免疫反应阳性部位,修整组织,用0.1mol/L磷酸缓冲液稀释的1%锇酸(pH7.4)后固定30min~1h。(7)按常规电镜样品制备,脱水、包埋、超薄切片、染色观察。...
...分为包埋前染色、包埋后染色和超薄切片免疫染色三种。1.包埋前染色 即先行免疫染色,在解剖显微镜下将免疫反应阳性部位取出,修整成小块,按常规电镜方法处理,经锇酸固定、脱水、包埋。如果特异性免疫反应的范围太小,为了准确定位,可作第二次包埋,即...
...应用于电镜水平的免疫法,可分为包埋前染色和包埋后染色,由于包埋前染色对细胞膜的穿透性差,一般只用于细胞表面的抗原标记,如需穿透细胞膜,则需辅以冻融法或加入Triton X—100、皂素等活性剂,后者会加重细胞超威结构的破坏,因此,现较普遍...
...由于DNA提取方法的改善和DNA质量的提高,几乎所有基因分析的技术均可用于石蜡包埋组织,但目前分子病理学研究的常用方法是点杂交、Southern印迹杂交和多聚酶链反应(PCR)。1.点杂交鉴于包埋组织DNA有一定程度的降解,因而点杂交被...
...在电镜技术的应用原则是二步标记法,可用于包埋前和包埋后染色。其主要区别于一般胶体金免疫染色在:①须1%卵白蛋白—PBs (pH7.4)或1%卵白蛋白—0.05mol/l Tris缓冲液(pH7.4)来封闭非特异性的结合部位,而不是采用羊或...
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