...(一)树脂包埋国内现普遍采用的是环氧树脂包埋法,可直接脱水后包埋,也可将小片组织或半薄切片贴在载片上,将充满环氧树脂的明胶囊倒置于切片上聚合、硬化,进行原位包埋。(二)低温包埋常规树脂包埋由于需高温聚合等处理程序,组织抗原性可能全部或部分...
...由于DNA提取方法的改善和DNA质量的提高,几乎所有基因分析的技术均可用于石蜡包埋组织,但目前分子病理学研究的常用方法是点杂交、Southern印迹杂交和多聚酶链反应(PCR)。1.点杂交鉴于包埋组织DNA有一定程度的降解,因而点杂交被...
...基因表达和调控,以及疾病过程的发展与转归等方面均具有重要意义。医院病理科档案中积存的大量石蜡包埋组织,是一个可靠的分子生物学研究的材料来源。在石蜡切片上进行原位杂交或原位PCR分析的分子生物学方法,是免疫细胞化学技术的重要延伸。通过对DNA...
...基因表达和调控,以及疾病过程的发展与转归等方面均具有重要意义。医院病理科档案中积存的大量石蜡包埋组织,是一个可靠的分子生物学研究的材料来源。在石蜡切片上进行原位杂交或原位PCR分析的分子生物学方法,是免疫细胞化学技术的重要延伸。通过对DNA...
...从石蜡包埋组织中提取DNA的基本步骤,是在常规DNA提取方法的基础上改良和演变而来。Goelz等(1985)最先提出的石蜡包埋组织DNA提取技术(表18-5),是用机械的方法破碎组织,切除多余的石蜡,直接进入含SDS和高浓度蛋白酶K(1...
...在解剖显微镜下检出免疫反应阳性部位,修整组织,用0.1mol/L磷酸缓冲液稀释的1%锇酸(pH7.4)后固定30min~1h。(7)按常规电镜样品制备,脱水、包埋、超薄切片、染色观察。...
...(1)超薄切片厚50~70nm左右,载于200~300网孔的镍网上。(2)置1%H2O2内10min至1h(视树脂的硬度和切片的厚度而定),以去锇酸和增进树脂穿透性,有利抗体进入。如切片很薄或于低温包埋时,此步可省略。操作时,滴入1%H2...
...)0.05mol/l TBS pH8.2洗3min。(11)0.05mol/l TBS pH7.4洗3min×3(12)1%锇酸(0.1mol/l PBS溶液)1h。(13)双蒸水洗15min。(14)系列酒精或丙酮脱水,包埋、超薄切片。(...
...分为包埋前染色、包埋后染色和超薄切片免疫染色三种。1.包埋前染色 即先行免疫染色,在解剖显微镜下将免疫反应阳性部位取出,修整成小块,按常规电镜方法处理,经锇酸固定、脱水、包埋。如果特异性免疫反应的范围太小,为了准确定位,可作第二次包埋,即...
...应用于电镜水平的免疫法,可分为包埋前染色和包埋后染色,由于包埋前染色对细胞膜的穿透性差,一般只用于细胞表面的抗原标记,如需穿透细胞膜,则需辅以冻融法或加入Triton X—100、皂素等活性剂,后者会加重细胞超威结构的破坏,因此,现较普遍...
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